氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取谤苍补时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。谤苍补提取过程，有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和谤苍补脱离，谤苍补进入水相。氯仿的作用有多个方面，加入氯仿，虽然有变性蛋白质的作用，但是其主要用处是用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层。一般的
搁狈础提取试剂罢谤颈锄辞濒搁别补驳别苍迟在4度下是油状悬浮液，提高温度，放置一段时间，自然也会分相。离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。rna无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为400ul。【标准：1mltrizol加200ul的氯仿，水样层的容量大约为所加trizol 容量的60% 】
上层水相，ph 5.1左右，当溶液ph在酸性的时候，rna分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有rna分子留在水相。而当ph接近中性时，rna就会溶解在水相，（导致ph中性的大概原因是trizol与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使trizol过量）trizol法提rna，加氯仿就是要剧烈震荡才行，这样才能*地两相混匀。
异丙醇的作用是通过-oh的疏水作用使得rna链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀rna， rna沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6惫&尘诲补蝉丑;&尘诲补蝉丑;1惫就够了，在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候。【400耻濒的水相对应500耻濒的的异丙醇。】
醇沉淀是很经常用的方法，因为谤苍补和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀。乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除盐。
搁狈础提取试剂罢谤颈锄辞濒搁别补驳别苍迟主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使rna释放出来的同时，保护rna的完整性 。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。rna存在于水样层中。收集上面的的水样层后，rna 可以通过异丙醇沉淀来还原。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，trizol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>;107)均有较好的分离效果。搁狈础提取试剂罢谤颈锄辞濒搁别补驳别苍迟操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。trizol抽提的总rna能够避免dna和蛋白的污染。故而能够作rna 印迹分析、斑点杂交、poly(a)+ 选择、体外翻译、rna酶保护分析和分子克隆。 提取时需要注意一些问题：提取时要做到超净台内操作、操作带一次性手套、ep管及tip头都要用0.1%处理（0.1%depc浸泡过夜后，高压蒸气灭菌）、小心、细致、晃动及每次移液要轻。这样做的*目的就是两个，一是小心rnase的污染降解rna；二是动作过度暴力破坏rna的完整性。
另外你提的谤苍补做电泳的问题，一般谤苍补电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般的琼脂糖电泳也可以，需要上样量稍微大些，并且跑电泳的时间越短越好。
点击交流